Rev. Fac. Agron. (Maracay), 15: 207-212. 1989.
1 Trabajo aceptado para su publicación 6/11/1989
Instituto de Botánica Agrícola. Facultad de Agronomía, U.C.V. Apdo. 4579 Maracay-2101-Aragua. Venezuela.
KEY WORDS: Poinsettia, Euphorbia pulcherrima, Bacterial angular spot, Corynebacterium flaccumfaciens pv. poinsettiae
Palabras Clave: Navidad Euphorbia pulcherrima, Mancha angular bacteriana, Corynebacterium flaccumfaciens pv. poinsettiae.
A pesar de no poder encontrar estadísticas en relación a la venta y movimientos de las plantas de navidad, negocio bastante rentable para muchos viveristas, los cuales han introducido al país variedades con vistosos colores, esta planta se encuentra en gran cantidad de hogares, sobre todo en los meses de Noviembre-Diciembre, reemplazando al tradicional pino navideño debido a lo económico que resulta en relación a éste.
En Diciembre de 1987 un grupo de plantas madres, provenientes de viveros del Edo. Aragua, mostraron a lo largo de sus tallos verdes una serie de estrías húmedas que se extendían hasta dentro de los pecíolos de las hojas. El avance de los síntomas produjo desfoliación completa de la planta, amarillamiento de la corteza y coloración marrón del sistema vascular, al final los tallos se tornaban marrones y se producía exudado, en otras ocasiones se observaban manchas necróticas de 1 mm hasta 3-5 mm de forma irregular distribuídas en toda la lámina foliar, y los síntomas se hacían sistémicos notándose amarillamiento y caída de la hoja, así como muerte de los retoños y yemas de crecimiento. Esto resulta grave para un viverista, ya que esta planta se propaga comercialmente por estacas y al perderse las plantas madres, el negocio se ve seriamente afectado.
Ante la posibilidad de tratarse de una enfermedad bacteriana, se procedió al estudio del material afectado con la finalidad de identificar al agente patógeno causante de esta sintomatología en plantas de navidad. Un adelanto de este trabajo fue presentado por Trujillo et al. en el Congreso Venezolano de Botánica (1988).
Para el estudio se seleccionaron diferentes tipos de síntomas tales como manchas necróticas, tallos con estrías húmedas y retoños en proceso de marchitamiento. En el caso de las manchas necróticas, algunas fueron cortadas con un bisturí estéril, tomando 2-5 mm de tejido, teniendo la precaución de tomar parte del tejido necrosado y parte aún no necrosado, con una pinza estéril este trozo de tejido fué colocado en un porta objeto con 1-2 gotas de agua destilada y dejado 2-3 minutos, luego se observó el flujo bacteriano a través de un microscopio óptico. Muestras similares de tejido provenientes de hojas, fueron maceradas en un mortero estéril con aproximadamente 6 ml de solución salina. De este macerado se realizó un estriado por agotamiento en placas Petri conteniendo agar nutritivo, se seleccionaron las colonias aisladas que crecieron en mayor abundancia luego de 24 hr de sembradas para obtener los cultivos puros, a los mismos se les realizó la coloración de Gram, la prueba de KOH al 3%, y la tinción del rojo congo, así como las pruebas de patogenicidad siguiendo los postulados de Koch. A los aislamientos que resultaron patogénicos les fueron estudiados sus características culturales en diferentes medios convencionales de cultivo (semisólidos y liquídos), así como una serie de pruebas fisiológicas rutinarias en la identificación de bacterias fitopatógenas, como la utilización de oxígeno, prueba de oxidasa, producción de H2S, desdoblamiento del almidón, la licuefacción de la gelatina, de acuerdo a los protocolos recomendados por The American Phytopathological Society (1980).
En el caso de los tallos que presentaban estrías húmedas y retoños en proceso de marchitamiento, se cortaron trozos de 2-3 mm colocándolos en alcohol y luego fueron flameados para desinfectarlos. Después se colocó sobre el mortero estéril y se procedió de igual manera como se describió para las manchas necróticas.
Pruebas de Patogenicidad: Se tomaron cultivos de 48 hr de crecimiento en agar - papa - dextrosa y se preparó una suspensión bacteriana con saline 107 bact ml-1, la cual fué inyectada en plantas sanas de navidad a nivel del tallo (seleccionando la parte no leñosa, tallo aún verde), de igual manera se procedió con algunas plantas que se tomaron como control inyectándose sólo con agua destilada. Las plantas inoculadas se mantuvieron en cámara húmeda por 24 hr y luego dejadas unas en condiciones de laboratorio (temperatura X 22°C) y otras en condiciones naturales (meses de Febrero, Marzo, Abril de 1988), para ser observadas periódicamente.
Los trocitos de tejidos a los que se les realizaron observaciones sobre presencia de flujo bacteriano, resultaron positivos mostrando una clara corriente bacteriana. En el medio agar nutritivo se encontró reiteradamente en todos los tipos de muestras estudiadas, una colonia bacteriana de color anaranjado ladrillo que crecía en forma lenta, alcanzando cerca de 1 mm a los tres días. Esta colonia resultó ser patogénica al ser inoculada sobre plantas sanas de navidad, repitiéndose toda la gama de síntomas mencionados como típicos de la enfermedad. Las colonias reaisladas de las manchas necróticas, tallos y retoños en vías de marchitamiento, coincidieron en forma y color con las inoculadas inicialmente (Postulados de Koch). Al realizar tinción de Gram, la colonia involucrada resultó Gram positiva o Gram variable, con la prueba de KOH al 3% ésta se comportó como Gram positiva, al observar las bacterias al microscopio óptico, mediante la tinción al rojo congo se pudo observar bastones de 0.2 - 0.5 x 1.0 - 3.0µ los cuales presentaban diversas formas (pleomórficos), encontrándose algunos en forma curva, se notó que muchas células al dividirse, quedaban unidas formando figuras parecidas a la letra V (dos células) o Y (tres células). Estos resultados preliminares nos señalaban que posiblemente estábamos ante la presencia del género Corynebacterium por lo que se orientó el trabajo a corroborar o descartar esta hipótesis. Estudiando las características morfológicas de la colonia se encontró que en agar nutritivo, es amarillo ladrillo, redondeada, convexa, con diámetro de 0.5 - 1 mm a los tres días de sembrada, de borde entero y lisa, las mismas características se repiten en agar - papa - dextrosa, pero el crecimiento es un poco mayor alcanzando las colonias hasta 2 mm en el mismo tiempo, en agar extracto de carne estas colonias no muestran color, son translúcidas. Se estudió el crecimiento en el medio de tetrazolium de Kelman (1954) encontrándose buen crecimiento y la coloración típica para este género en dicho medio, en caldo de extracto de carne, los tubos se tornan túrbidos en 24 hr con crecimiento abundante y se produce sedimento amarillo suave, pero hay formación de película en la parte superior del tubo. La colonia bacteriana no creció en el medio de Hugh y Leifson (1953) por lo que se considera aeróbica, la bacteria no produjo H2S, licuó la gelatina débilmente después de doce días, hidrolizó el almidón, fué oxidasa negativa y después de 37°C la bacteria detiene el crecimiento. Todo lo anterior coincide con lo señalado en el Bergey's Manual of Determinative Bacteriology (1977), Breed et al. (1957), para Corynebacterium poinsettiae sin embargo de acuerdo a Dye y Kemp citados por Vidaver (1982) sólo C. ilicis, C. fascians, C. michiganense y C. flaccumfaciens son reconocidas como especies, considerándose la que afecta a la planta de la navidad un patovar de C. flaccumfaciens. Esta posición ha ganado apoyo en Fahy y Persley (1983), Carlson y Vidaver (1982), Vidaver y Starr (1981), y se han incorporado nuevas pruebas para sustentarla. Resulta interesante hacer notar que investigadores como Rosenthal y Cox (1954) ya habían llegado a esta conclusión al no poder separar C. flaccumfaciens y C. poinsettiae mediante pruebas serológicas.
Por otra parte, esta enfermedad es conocida en los Estados Unidos de Norte América desde hace mucho tiempo (Starr y Pirone, 1942; Dowson, 1949), causando serias infecciones en viveros de navidad en Nueva Jersey, Maryland, Pensilvania y Nueva York. Con la comercialización de esta planta, la enfermedad se extendió a otros estados de este país durante los años 50, Welburg (1966) señaló que una vez que la planta ha sido infectada por la bacteria, ésta no puede ser eliminada de la misma, y muchas veces no se observan síntomas foliares, sin embargo la bacteria se encuentra en los tallos por lo que la propagación de esta planta debe realizarse de plantas madres sanas y las plantas enfermas deben ser eliminadas.
El Departamento de Agricultura del estado de Florida, E.E.U.U., recomienda como medidas preventivas la aplicación de Agrimicyn 500 y mezclas de cobre y Maneb para prevenir la infección de las hojas jóvenes.
El conocimiento sobre la existencia de este género de bacterias en el país es escaso, encontrándose sólo citada la bacteria C. sepedonium causante de la pudrición anular de la papa (Rodríguez, 1958). Este trabajo enriquece nuestro conocimiento acerca de este género de importancia para las plantas cultivadas.