BACTERIOSIS DEL MANGO (Mangifera indica l.) EN VENEZUELA. 1. SINTOMATOLOGIA E IDENTIFICACION

INTRODUCCION

El mango es uno de los frutales de mayor importancia económica en Venezuela por su volumen de producción y superficie cultivada. Para el año 1978 se tenía bajo cultivo 7.354 ha, que producían 430.197.000 unidades (10), lo cual representa una población considerable de árboles que entran en producción coda año, sin tomar en cuenta un elevado número de ellos que se han plantado recientemente.

No obstante ese incremento, los huertos ubicados en diferentes regiones del país se encuentran seriamente amenazados por una enfermedad bacteriana que ataca el bronco, las ramas, las inflorescencias, el pedúnculo y los frutos; esta bacteriosis se ha observado sobre gran número de árboles, siendo las principales variedades comerciales las más afectadas; el problema se ha venido agravando en los últimos años, hacienda crisis en plantaciones ubicadas en Ocumare del Tuy.

Es importante señalar que una anomalía parecida fue inicialmente reportada en 1915 por DOIDGE como Bacillus mangifera, luego BERGEY, en 1923, describe una pudrición en frutos y broncos de mango en Sur Africa causada por Erwinia mangifera (3). Manifestaciones similares fueron reseñadas en 1948 por PATEE y PADHYE, en Bombay, atribuidas a Bacterium carotovorus (5); en 1970 por DÍAZ POLANCO, APONTE y FIGUEROA, en Venezuela (2); estos últimos atribuyeron a una bacteria del género Xanthamonas la pudrición de los frutos de mango. En 1972, TORRES RODRIGO, TAFURT y BEJARANO, en Colombia (8), describen en el trono del árbol un mal que ellos denominan "cuarteado del mango", observando el fenómeno en diversas áreas de su país pero sin llegar a determinar con exactitud el agente causal.

En el presente trabajo se describe la sintomatología de la bacteriosis observada sobre diversos órganos del árbol, se dan los resultados de las pruebas de patogenicidad efectuadas en frutos y tronco y también se señalan las reacciones fisiológicas y bioquímicas que sirvieron de base para identificar el organismo causal.

SINTOMATOLOGIA

En la mayoría de los cases el aspecto externo del fruto es normal, aunque a veces se observe alrededor del pedúnculo una zona hundida de color marrón oscuro, la cual se corresponde en su interior con una necrosis que avanza hacia 1a semilla, provocando que los haces vasculares se ennegrezcan, y en cases extremes, afectando al embrión (fig. 1). Al mismo tiempo, gotas de exudado pueden correr desde el pedúnculo hacia la parte inferior del fruto, causando un manchado en la superficie. También la bacteria cause la caída prematura de los frutos recién formados, los cuales presentan necrosis interna y exudado gomoso en la zona peduncular (fig. 2).

En las hojas, la bacteria se encuentra generalmente asociada con hongos del género Colletotrichum sp. y Pestalotia sp., ocasionando manchas pequeñas, angulares, de 2-3 mm o a veces manchas grandes en los bordes que le dan un aspecto de quemado (fig. 3).

En los pecíolos el síntoma consiste en pequeñas grietas o surcos de aproximadamente 1 cm de largo, de aspecto corchoso, pudiendo o no haber secreción gomosa de color marrón oscuro en la zona afectada.

En el bronco y /o ramas se observan lesiones longitudinales, variables en tamaño, de las cuales sale una secreción gomosa de color rosada a marrón oscuro que al secarse se torna negra, siendo ésta más abundante en época lluviosa; la lesión constituye un verdadero "chancro" o "cancro" que al cortarse presenta en su interior canales de color pardo-rojizo que avanzan hacia la parte superior del árbol (figs. 4 y 5).

Fig. 1. Frutos de mango; obsérvese que la necrosis ocasionada por la Erwinia, avanza desde el pedúnculo hacia la semilla, dañando esta última.

Fig. 2. Fruto de mango, variedad Manzano; nótese la pudrición bacteriana en la zona peduncular.

Fig. 3. Hoja de mango con los bordes quemados por acción de la bacteriosis del mango.

MATERIALES Y METODOS

Aislamiento

El patógeno se aisló de frutos y cancros de árboles pertenecientes a las variedades Haden, Irwin, Manzano y Bocado, cultivados en par celas en Ocumare del Tuy, Turmero, Huerto del CENIAP v otras regiones del país. Se procedió de la manera siguiente:

En frutos: se desinfectaron con bicloruro de mercurio al 1%o, hipoclorito de sodio al 1%, o con alcohol etílico al 90°C, limpiando la superficie con algodón impregnado con alguna de estas sustancias; flameando a la llama y cortando con bisturí la zona peduncular del fruto, tomando con pinza estéril los trocitos de tejido interno y sembrando los mismos en colas de Petri conteniendo agar-papa-glucosado (P.D.A.), O agar nutritivo (A.N.). La operación se realizó en cámara de aislamiento de flujo laminar estéril para evitar contaminación externa.

En bronco, pedúnculo e inflorescencia: se desinfectaron los trocitos de tejidos con hipoclorito de sodio al 1% durante dos minutos, lavándolos con agua estéril y colocándolos en tubos de ensayo conteniendo 3 ml de agua estéril, dejándose por espacio de echo a doce horas, tomando un ansa de platino y estriándose el contenido de estos tubos en cajas con los medios de cultivo antes señalados. Otra manera de aislar el organismo fue hacienda un macerado con trocitos de tejido enfermo, en mortero esterilizado. añadiendo gotas de agua estéril, tomando con ansa de platino y sembrando por estrías en cajas de Petri conteniendo media de cultivo, las cuales fueron incubadas a 28°C durante dos días, observándose la aparición de colonias que luego fueron purificadas, estriando sucesivamente hasta obtenerlas de aspecto homogéneo, siendo pasadas a tubos conteniendo A.N. o media 523 (4 ) para su conservación en nevera (fig. 6).

Fig. 4 y 5. Obsérvese en ambas las lesiones longitudinales en el bronco del árbol en la primera se aprecia una secreción gomosa de color rosado que sale de la parte interna y en la segunda se observan los "cancros" o "chancros" que se hacen visibles al quitar la corteza; estas lesiones avanzan hacia la parte superior de la planta.

Fig. 6. Nótese el aspecto y coloración que presentan las dos especies de bacterias en media 523, las mismas son las responsables de la pudrición del fruto así como del "cancro" o "chancro" del bronco y ramas del mango.

Fig. 7 y 8. Frutos de mango inoculados; en la primera foto, obsérvese la pudrición marrón del fruto, variedad Kent, inoculado en relación al testigo y en la segunda, se nota que los dos aislamientos ( blanco y amarillo ) producen síntomas similares, pudrición marrón, sobre frutos de la variedad Sensation.

Inoculación

Los aislamientos purificados fueron inoculados sobre frutos verde o pintones principalmente de las variedades siguientes: Haden, Manzano, Irwin, Bocado, Kent y Sensation, dejando testigos como patrón de comparación. Las pruebas de patogenicidad se realizaron con una suspensión de bacterias en agua destilada estéril (provenientes de colonias de 48 horas de crecimiento), con una densidad óptica aproximada de 0,3 medida en colorímetro Spectronic 20, la cual se inoculó en frutos mediante una jeringa estéril, inyectando 1/2 -1 cm3 de suspensión. Este tratamiento fue aplicado en la base del pedúnculo y en la pulpa (mesocarpo) del fruto, colocando en la parte tratada un algodón humedecido con agua estéril. El material inoculado se colocó en cámara húmeda y las observaciones se hicieron desde tres hasta ocho días después de efectuada la operación, los testigos se inocularon con agua estéril (fig. 7-8). La inoculación en ramas se hizo con jeringa estéril, previa herida del tejido con bisturí, colocándose un algodón humedecido y luego cubriéndose con una balsa plástica a manera de cámara húmeda por espacio de dos a tres días.

Pruebas Bioquímicas y Fisiológicas

Se realizaron pruebas con aislamientos del patógeno provenientes del fruto y bronco, las cuales incluyeron: reacción de Gram, forma y tamaño del organismo, color de las colonias, crecimiento en diversos medios: P.D.A., A.N., 523 y D3 de K A D O, acción sobre la leche Litmus, reducción de nitratos a nitritos, producción de hidrógeno sulfurado, producción de Indol, producción de catalasa, producción de citocromo-oxidasa, hidrólisis del almidón, licuefacción de gelatina, requerimientos de oxígeno, acidificación de glucosa y lactosa. En coda prueba se siguió la metodología indicada en manuales especializados en la materia (1, 4, 6, 9).

RESULTADOS

Los aislamientos mostraron que el organismo se encontraba en forma persistente en los frutos, pecíolos, inflorescencias, hojas, ramas y bronco de árboles afectados, igualmente las bacterias aisladas de cualquier órgano tenían el mismo aspecto y consistencia pero diferente coloración, amarillo o blanco grisáceo, encontrándose por separado o asociados en l as partes afectadas. Las pruebas de patogenicidad realizadas con esas bacterias produjeron síntomas similares de necrosis en frutos y ramas, observándose que el aislamiento blanco grisáceo tenía mayor virulencia pares originó síntomas más severos. También se hicieron inoculaciones cruzadas con los aislamientos de frutos y ramas, obteniéndose resultados positivos (fig. 9 ).

En la inoculación de frutos verdes de 23 variedades con cuatro aislamientos diferentes dos de color blanco y dos de color amarillo, se observó que a partir del tercer día los frutos mostraban necrosis en el sitio inoculado; en 1a pulpa, la necrosis profundiza en el tejido originando cavidades y reblandecimiento de esa zona; en el pedúnculo, la necrosis avanza por los haces vasculares hacia la semilla, llegando al interior de la misma, causando ennegrecimiento que afectaba el embrión y con ello su germinación.

Fig 9. Frutos de la variedad Pascual, inoculación cruzada, parte izquierda inoculada con aislamiento procedente del bronco, nótese la explosión del tejido peduncular y al lado derecho inoculado con aislamiento procedente del fruto, se ve solamente necrosamiento y avance por los haces vasculares.

Fig. 10. Bacteria en estudio, observada al microscopio electrónico, nótese los flagelos peritricos (de mayor longitud) característicos del género Erwinia.

Fig. 11. Reacción de diversos aislamientos de fruto y tronco en el media D3 de KADO, todos forman colonias anaranjadas, reacción característica del género Erwinia.

De los tejidos afectados se hicieron reaislamientos obteniéndose colonias bacterianas con características similares a las inoculadas en coda case . Entre l as variedades probadas en condiciones de laboratorio, solamente la Julie y Amini mostraron tolerancia (Cuadro 1). Asimismo, las ramas de plantas inoculadas, mantenidas en el umbráculo mostraron grietas o surcos de color marrón oscuro, semejando "cancros" de cuyo interior salía una secreción gomosa; estos síntomas se incrementaron a medida que transcurrió el tiempo desde 15 días hasta 12 mesas; de esos tejidos se reaislaron bacterias cuyas características coincidieron con los aislamientos originales.

CUADRO 1. Frutos inoculados con 109 aislamientos 1-a, 2-b (provenientes de cancro) y 3, 4-a (provenientes de frutos) infestados con bacterias.

Método: Inoculación con jeringa ( 1 cc) a la pulpa del fruto, al estado verde.

Después de verificada la patogenicidad de las bacterias, fueron observadas sus características culturales, tales como: a 28°C crecimiento lento en A.N. y rápido en P.D.A., colonias de forma circular y bordes lisos. También se realizaron con los cuatro aislamientos de frutos y bronco una serie de pruebas bioquímicas y fisiológicas, tendientes a lograr la identificación del patógeno, resultando todas Gram negativa, al microscopio electrónico tenían flagelos peritricos y forma de bastón (fig. 10), todas formaron colonias anaranjadas en el media D3 de KADO, específico para el género Erwinia (fig. 11) la prueba de catalasa dio positiva, producción de oxidasa negativa y ellas son anaerobias facultativas, coincidiendo estas pruebas con las reportadas en el manual de BERGEY ( 1 ) para el género Erwinia (Cuadro 2 ).

CONCLUSIONES

La sintomatología observada en frutos, peciolos y broncos, coincide con la descripción señalada en el Manual de ELLIOT (3) por (DOIDGE) BERGEY en Sur Africa, para la pudrición bacteriana por Erwinia manéifera; esa bacteria había sido descrita en Venezuela por RONDÓN y FIGUEROA (7), como agente causal de la mancha negra de los frutos de mango; de igual modo es señalada una pudrición de los frutos por PATEL y PADHYE (5) causada por Bacterium carotovorus. Aunque en este trabajo todos los aislamientos resultaron pertenecientes al género Erwinia, en las pruebas bioquímicas y fisiológicas realizadas se observó que las bacterias de color amarillo son ligeramente de mayor tamaño, acidifican la glucosa, no la lactosa y forman coágulo en la leche de Litmus; en cambio, los aislamientos de color blanco grisáceo acidifican tanto la glucosa como la lactosa y no coagulan la leche de Litmus. Por lo tanto, se puede concluir que los aislamientos de color amarillo, (Figures 3 y 4-a) corresponden a la bacteria Erwinia mangifera (Doidge ) Bergey, mientras que los aislamientos de color blanco grisáceo (Figuras 1-a y 2-b) pertenecen a Erwinia carotovara (L. R. Jones ) Holland; estos organismos, actuando en forma individual o en asociación, son los agentes causales de la pudrición del fruto y "cancro" del tronco del mango en Venezuela.

CUADRO 2. Pruebas bioquímicas realizadas con aislamientos de bacterias causantes de la pudrición de los frutos y bronco del mango.

AGRADECIMIENTO

Se agradece al Dr. M. N. SCRHOTH, de la Universidad de California, Estados Unidos, por su ayuda en la identificación de los aislamientos.

RESUMEN

Se aislaron bacterias del género Erwinia, de frutos y "cancros" de árboles de mango pertenecientes a las variedades Haden, Irwin, Manzano y Bocado, ubicados en parcelas de Ocumare del Tuy, Turmero, huerto del CENIAP y otras regiones productoras del país, las cuales, inoculadas bajo condiciones de campo. umbráculo y en ambiente controlado, demostraron ser el agente causal de la enfermedad. Los síntomas en el fruto comenzaban por la zona peduncular, siendo su aspecto externo, en la mayoría de los cases normal, aunque a veces se observaba una zona hundida de color marrón oscuro, en cuyo interior aparecía una necrosis que progresaba hacia la semilla, los haces vasculares se ennegrecían y en cases avanzados afectaba el embrión. En las hojas, la bacteria ocasionaba manchas pequeñas o a veces manchones hacia los bordes, dando un aspecto de quemado al órgano. En el bronco y ramas, el patógeno originaba lesiones longitudinales, de cuyo interior salía una secreción gomosa de color rosado a marrón oscuro. De acuerdo a las pruebas bioquímicas y fisiológicas realizadas con las bacterias aisladas, así como las reacciones observadas sobre los diferentes órganos inoculados, se identificó el aislamiento de color amarillo como Erwinia mangifera (Doidge) Bergey, mientras que el aislamiento blanco grisáceo como Erwinia corotavora (L.R. Jones ) Holland. Estos organismos actuando en forma individual o en asociación son los responsables de la pudrición cle los frutos y del "cancro" o "chancro" del tronco del mango en Venezuela.

SUMMARY

BIBLIOGRAFIA

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